Allele | Rough-fur | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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Mutation Type | missense | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Chromosome | 11 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Coordinate | 99,279,644 bp (GRCm39) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Base Change | T ⇒ A (forward strand) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Gene | Krt10 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Gene Name | keratin 10 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Synonym(s) | K10, cytokeratin 10, keratin 10, K1C1, Krt-1.10, suprabasal cytokeratin 10, D130054E02Rik, Krt1-10 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Chromosomal Location | 99,276,080-99,280,190 bp (-) (GRCm39) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
MGI Phenotype | PHENOTYPE: Mutations may result in hyperkeratosis and blistering of the skin. [provided by MGI curators] | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Accession Number |
NCBI RefSeq: NM_010660; MGI: 96685
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Mapped | Yes | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Amino Acid Change | Glutamic Acid changed to Valine | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Institutional Source | Beutler Lab | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Gene Model | not available | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
AlphaFold | no structure available at present | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
SMART Domains |
Protein: ENSMUSP00000099420 Gene: ENSMUSG00000019761 AA Change: E172V
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Predicted Effect | probably damaging
PolyPhen 2 Score 0.989 (Sensitivity: 0.72; Specificity: 0.97) |
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Predicted Effect | probably benign | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Meta Mutation Damage Score | Not available | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Is this an essential gene? | Possibly nonessential (E-score: 0.304) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Phenotypic Category | Autosomal Dominant | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Candidate Explorer Status | loading ... | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Single pedigree Linkage Analysis Data |
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Penetrance | 100% | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Alleles Listed at MGI | All alleles(16) : Targeted, knock-out(2) Targeted, other(1) Gene trapped(12) Chemically induced(1) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Lab Alleles |
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Mode of Inheritance | Autosomal Dominant | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Local Stock | Embryos | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
MMRRC Submission | 031074-MU | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Last Updated | 2016-05-13 3:09 PM by Stephen Lyon | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Record Created | unknown | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Record Posted | 2009-03-04 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Phenotypic Description | The Rough-fur mutation was identified in G3 mice derived from N-ethyl-N-nitrosourea (ENU)-mutagenized C57BL/6J stock. The fur of this mutant is "rough" but of normal length and color (Figure 1). There is no greasy or polished appearance as seen in mice carrying mutations in the Krt33a gene (see Polished, Polished2 and Spikey). It is also visibly distinct from mutations in the Krt25 gene (see Plush and Sinuous) and Egfr (see Velvet). |
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Nature of Mutation |
The Rough-fur mutation corresponds to an A to T transversion at position 547 of the Krt10 transcript, in exon 1 of 8 total exons.
531 ATCAAGGAGTGGTACGAGAAGCATGGCAACTCA
167 -I--K--E--W--Y--E--K--H--G--N--S-
The mutated nucleotide is indicated in red lettering, and causes a glutamic acid to valine change at residue 172 of the Keratin 10 (K10) protein.
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Illustration of Mutations in Gene & Protein |
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Protein Prediction |
The mouse K10 protein has 561 residues, and is 92% identical to the 554 amino acid human protein. K10 is an epithelial keratin that belongs to the type I (acidic) keratin family (1).
In order to form intermediate filaments, the α-helical chains of two keratin molecules dimerize to form a coiled-coil structure. Keratin dimers then associate via their HIM and HTM motifs in a head-to-tail fashion to form linear arrays, four of which associate in an antiparallel, half-staggered manner to produce protofibrils. Three to four protofibrils intertwine to produce an apolar intermediate filament 10 nm in diameter (Figure 2B). The assembly equilibrium is heavily in favor of polymer formation (7). Keratins contain a high proportion of the small amino acids glycine and alanine, which facilitates the assembly of individual keratin molecules into IFs and allows sterically unhindered hydrogen bonding between the amino and carboxyl groups of peptide bonds on adjacent protein chains, facilitating their close alignment and strong cohesion (4;8).
The Rough-fur mutation results in the substitution of a glutamic acid for a valine at amino acid 172 of Keratin 10. This residue is located in the first linker (L1) domain.
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Expression/Localization |
Along with the type II keratin K1, K10 is expressed in terminally differentiating suprabasal cells of the epidermis and other cornifying epithelia and is the main type I keratin gene expressed in these tissues (9-12). In the sweat gland, K10 is expressed throughout the duct region, but not in the deeper secretory portion of the gland (13). K10 is also expressed in the infundibulum of the hair follicle (14), and is detected in suprabasal areas of the eponychium and hyponichium of the nail (15). Some K10 expression is seen in the apical matrix of the nail.
Mice, unlike humans, have stratified squamous epithelia present in the esophagus and forestomach. Like the epidermis, this tissue also expresses K1/K10 cytokeratins (16).
K10 is a component of cytoplasmic keratin intermediate filaments, which extend from the periphery of the nucleus to the plasma membrane where they attach to desmosomes and hemidesmosomes (7). | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Background |
Keratins are cytoplasmic proteins that form the intermediate filaments (IFs) of epithelia including cells of the skin, lung, esophagus, gut and hair. IFs are intermediate in diameter between actin (microfilaments) and microtubules. Keratins are expressed in a cell type and differentiation specific manner, and are subdivided into the type I (acidic) and type II (basic) keratins. The genes of the type I and type II keratin subfamilies are clustered in the genomes of mice and humans with the type I keratins localized to mouse Chromosome 11 and Chromosome 17q21.2 in humans, and the type II keratins localized to mouse Chromosome 15 and Chromosome 12q13.13 in humans. In humans, there are 54 keratin proteins, 28 type I and 26 type II (17). Keratins form obligate heterodimers between one type I and one type II keratin (4). Although all type I keratins can pair with all type II keratins in vitro, in vivo this pairing is much more selective, even when multiple keratins are expressed in the same tissue.
The skin serves an important function as a barrier to the environment, and maintains its integrity by continuously renewing the epidermis, while also maintaining associated structures such as hair (18). The epidermis is a stratified epithelium, composed of an inner layer of dividing cells and outer layers of terminally differentiating cells. All of these layers display extensive keratin filament networks. The dividing cells produce 20 to 25% of their protein as K5 (type II) and K14 (type I); the differentiating cells shut off expression of these keratins and switch to expressing K1 and K10 (and later the type II keratin K2), which ultimately will constitute up to 85% of the protein of the fully differentiated cell that is sloughed from the skin surface (7). The type II keratin K6 and the type I keratins K16 and K17 are characteristic of epithelial cells induced to hyperproliferate by disease or injury. These keratins are also expressed in the epithelium of several epidermal appendages such as the hair follicle and nail as well as oral epithelium. Portions of the epidermis typically undergoing heavy stress, such as the palms and soles of the feet, express multiple type I keratins including K9, K10 and K16 (19).
The primary function of keratins is to form a resilient yet adaptable scaffold allowing epithelial cells to sustain mechanical stresses. However, increasing evidence suggests they may be involved in nonmechanical roles such as apoptosis and protein targeting. In order to achieve both mechanical and nonmechanical functions, keratins associate with keratin-associated proteins (KAPs) that result in keratin phosphorylation, glycosylation, transglutamination, proteolytic cleavage, ubiquitination, or association with other cytoplasmic or cytoskeletal elements. KAPs have many functions and include the linker proteins plectin, plakophilin 1 and desmoplakin that connect keratin IFs to cytoskeletal elements, the bundling proteins filaggrin and tichohyalin, adaptor/signaling molecules including 14-3-3 proteins and TNF (tumor necrosis factor) receptor type 2, as well as various chaperones, kinases, and other enzymes (21).
Mutations in the genes encoding keratins or the many keratin-associated proteins result in a spectrum of keratinizing skin and tissue disorders, which depends upon the specific expression pattern of the keratin protein and results in abnormal fragility of the affected tissue (7;19;22). In response to cell cytolysis, tissue hyperproliferation occurs in a process known as hyperkeratosis. The majority of keratinizing disorders affects the epidermis and associated appendages, but can also affect mucosal or corneal epithelia depending on the keratin involved. Mutations in the KRT10 and KRT1 genes typically cause epidermolytic hyperkeratosis (EHK; OMIM #113800), also known as bullous erthroderma icthyosiformis congenita of Brocq (23-27). This disorder is characterized by redness (erythroderma), blistering (bullous) and hypertrophy (ichthyosis-like) of the skin. Blistering lesions are seen at birth or soon after and are due to cytolysis of the suprabasal keratinocytes. Lesions can be fatal in infants because of secondary infection. Blistering subsides with age but patients develop progressively thickened hyperkeratotic skin due to basal cell hyperproliferation. Mutant K10 protein in patients interferes with proper filament network formation, leading to intermediate filament clumping and cell degeneration (28). Related skin disorders caused by KRT10 and KRT1 mutations include epidermolytic epidermal nevus (OMIM #600648) and annular epidermolytic ichthyosis (OMIM #607602) (29-31). A mutation in KRT1 has been found to cause Curth-Macklin type ichthyosis hystrix (IHCM; OMIM #146590) in which localized thickening or keratoderma can give the appearance of ridges or spikes on the skin surface. This disorder is caused by cell fragility, and it is likely that some KRT10 mutations will cause an equivalent disease phenotype. Mutations in KRT1 also cause a number of palmoplantar skin disorders, but it is likely that in these regions, K1 is associating with K9 or K16 as mutations in the genes encoding these keratins also cause epidermolytic palmoplantar keratoderma (EPPK; OMIM #144200) (19). However, a variant form of EPPK has been linked to a rare KRT10 polymorphism that causes changes in the glycine loops (32)
In mice, transgenic expression of a mutant K10 protein mimicked EHK showing the typical subrabasal cytolysis, abnormal keratin filament formation and hyperkeratosis due to proliferation of basal cells (33). A targeted deletion of the Krt10 gene expressing a truncated K10 protein, resulted in similar phenotypes. Homozygous animals developed severe skin fragility and died shortly after birth, while heterozygous animals developed hyperkeratosis on exposed skin surfaces (34). By contrast, complete absence of K10 in mice resulted in a very mild phenotype (35). These animals displayed an intact epidermis without signs of increased fragility or cytolysis, which may be explained by the persistence of the basal keratins K5, K14 and K15 suprabasally. Ultrastructurally, keratin aggregates were found and shown to consist of residual K1, which formed atypical heterodimers with K14. However, loss of K10 leads to increased proliferation of basal cells (36), and increases the differentiation of epidermal stem cells towards the sebocyte lineage (37). Interestingly, K10 null mice exhibit decreased tumor formation in a tumor induction assay (38), although mice expressing transgenic expression of K10 in the basal epidermis showed a delay in tumor onset (39).
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Putative Mechanism |
Although the vast majority of keratin disorders are dominant, autosomal recessive versions of EHK have been reported (41;42). A complete absence of K10 protein is noted in all of these patients, but disease presentations vary from mild to severe. In patients with severe disease, the disorder resembles severe autosomal dominant EHK. However, the keratin aggregates present in the keratinocytes of these patients differ in form and distribution presumably due to the lack of K10. Induction of K6, K16 and K17 in the suprabasal epidermis occurs, and probably contributes to the formation of the abnormal keratin aggregates (41). The severe phenotype of some of these patients contrasts to the mild phenotype exhibited by K10 null mice (35), which may be explained by additional stability against mechanical stress provided by pelage hair. Additionally, K10 null mice do not induce expression of K6 and K16 in their epidermis. Thus, these keratins do not contribute to the formation of abnormal keratin aggregates. As in K10 null mice, persistence of K14 expression in suprabasal layers is seen in the K10 deficient humans with severe disease, but basal keratins are not able to compensate for the loss of K10 (41). The mechanisms underlying the phenotypic differences in K10 null humans are unknown.
The Rough-fur mutation alters a highly conserved amino acid in the first linker domain of the K10 protein. Unlike the α-helical domain, the linker domains of keratin proteins are not typically important for heterodimerization of keratin molecules. Disease-causing mutations in the L1 domain of keratins are very rare, and all of the disease-associated variations in the human K10 protein occur in the α-helical domains (please see the intermediate filament database at www.interfil.org). However, the amino acid changed in the Rough-fur mutation is located at the beginning of the linker domain, and may change the structure of the adjacent α-helical domain and interfere with the coiled-coil formation of keratin dimers.
Hair abnormalities have not been noted in humans or mice expressing mutant K10 proteins. However, skin and hair abnormalities are common in patients carrying mutations in genes encoding other epithelial keratins such as K6, K16 and K17 (pachyonichia congenita; OMIM #167200, #167210) or mutations in the genes encoding the hair keratins, which cause monilethrix (OMIM #158000) or ectodermal dysplasia of hair and nail type (OMIM #602032) (17;22). As the phenotype in Rough-fur mice is mild (rough fur, no skin defects), it is possible alterations in K10 in humans may also cause similar phenotypes that have gone unnoticed. Most alterations in hair morphology occurring due to keratin abnormalities occur in keratins that are expressed in the deep part of the hair follicle that plays an important role during hair morphogenesis or in the hair shaft itself. K10 is expressed only in the upper part of the hair follicle. However, it remains possible that aberrations in this portion of the hair follicle may cause the hair abnormalities observed in Rough-fur mice.
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Primers | Primers cannot be located by automatic search. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Genotyping |
Rough-fur genotyping is performed by amplifying the region containing the mutation using PCR, followed by sequencing of the amplified region to detect the single nucleotide change.
Primers for PCR amplification
Rfur(F): 5’- CAGCACACTTGCTACTTACTGCAATTC -3’
Rfur(R): 5’- GCAGCCGACCCTTTCCTTTATAGTATG -3’
PCR program (use SIGMA JumpStart REDTaq)
1) 94°C 2:00
2) 94°C 0:30
3) 56°C 0:30
4) 72°C 1:00
5) repeat steps (2-4) 29X
6) 72°C 7:00
7) 4°C ∞
Primers for sequencing
Rfur_seq(F): 5’- TGGCCTCCTACATGGACAAAG -3’
Rfur_seq(R): 5’- GTAGTCTGTCATCCTGGACGAC -3’
The following sequence of 1489 nucleotides (from Genbank genomic region NC_000077 for linear DNA sequence of Krt10 plus 419 additional nucleotides taken from NCBI m37 mouse assembly Chromosome 11: 99246568:99251097) is amplified:
-419 cagcacact tgctacttac tgcaattcgc aaagctatct aaaacaggaa tttgaaaaat
-360 ccttatttca actacaattt ataagcaaag ttcttttact ttttgaacct agcaagtact
-300 aagtacaagc taaattaaca ttagaaaatt agatttttaa tagttactca atgatcttca
-240 aaaggtaaaa tgtactcatg tgaactccac ccattctcag tttcaacata gcaaatttcc
-180 catctgtact cagggcaaat tcaaaagcat tgaaaaggta ttggttatta ctgaagataa
-120 tttatgcaat cataagccaa agatgctatg ctggcaaaaa gaaaaccatg caagtaagca
-60 aagcctagca cctgtgagac acgccctctc agtatataaa ggctcggcac tgtccttggt
1 agcaggcact ccctgggcta cactacacca ccatgtctgt tctatacagc tccagcagca
61 agcagttctc ttcctcccgc agtggaggag gaggcggtgg tggatccgtc agggtttcca 121 gcaccagggg ctctcttggt ggagggtata gctcaggagg cttcagcggt ggctctttta 181 gccgtgggag ctctggggga ggttgctttg ggggctcatc aggtggttac ggaggttttg 241 gaggaggagg cagctttggg ggaggctatg gaggaagcag ctttggggga ggctatggag 301 gtagcagttt tgggggtggc agcttcggtg gaggtggcag cttcggtgga ggcagctttg 361 gtggcggtag ctatggagga ggctttggcg gtggtggatt cggaggagat ggtggcagcc 421 ttctctccgg aaacgagaag gtgaccatgc agaacctgaa cgaccgcctg gcctcctaca 481 tggacaaagt ccgggctctg gaagagtcaa actacgagct ggagggtaaa atcaaggagt 541 ggtacgagaa gcatggcaac tcaagccagc gagagccccg ggactacagc aaatactaca 601 aaaccatcga ggaccttaag gggcaggtaa ggcgcttcag actccggctt tccatcgttc 661 ctaggcatgc aatgcagagg aagctatgcc aagtgtggca cagctgactg ctgtctcttc 721 cctgttacct tttcatgtct agtgtaacca ggcctcatca aagatattta tggcaatgtg 781 tcatctagca tgtgtgttgc ctgtcgtcca ggatgacaga ctactgagaa ccttataggt 841 tttaacacac atatgcgagt tcacagttaa aataggctag gtcatacata agtgtgggag 901 ctaagataat tttaaatgag tatgttacat atatgcatat atatgtatag atatgtataa 961 attcacccct agaagtattt ataacaagtt aaacagatac aaacatgagt cactcaaaag 1021 ttagctgcaa cacaaacaaa tcacatacta taaaggaaag ggtcggctgc
PCR primer binding sites are underlined; sequencing primer binding sites are highlighted in gray; the mutated A is shown in red text.
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References |
2. Rogers, M. A., Winter, H., Langbein, L., Bleiler, R., and Schweizer, J. (2004) The human type I keratin gene family: characterization of new hair follicle specific members and evaluation of the chromosome 17q21.2 gene domain, Differentiation 72, 527-540.
4. Hatzfeld, M., and Franke, W. W. (1985) Pair Formation and Promiscuity of Cytokeratins: Formation in Vitro of Heterotypic Complexes and Intermediate-Sized Filaments by Homologous and Heterologous Recombinations of Purified Polypeptides. J. Cell Biol. 101, 1826-1841.
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Science Writers | Nora G. Smart | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Illustrators | Diantha La Vine | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Authors | Xin Du, Xiao-hong Li, Bruce Beutler |